Hanta virus

Wednesday, June 14, 2006

Diagnóstico

El diagnóstico es clínico, radiológico y microbiológico.

Diagnóstico clínico

  • Aspectos clínicos en la admisión :
Los pacientes suelen presentar en la etapa prodrómica fiebre, mialgias y escalofríos, asociándose frecuentemente, náuseas, vómitos, cefaleas, diarreas y malestar general.
En ocasiones se acompañan de respiración suspirosa, vértigo, artralgias, dolor precordial o del dorso del tórax, dolor abdominal y lumbar, sudoración y tos. Raramente comienzan con rinorrea.
  • Al examen físico presentan:
A nivel pleuro pulmonar taquipnea, y estertores crepitantes.
Piel y mucosas: Inyección conjuntival, petequias cutáneas y microvesículas en el paladar.
Cardiovascular: taquicardia.

Evolución:
El cuadro clínico prodrómico dura entre 3 y 6 días, tras lo cual se alcanza el período de estado con complicaciones cardiorrespiratorias, disnea, hipoventilación, severa inestabilidad hemodinámica y shock, con una duración promedio de 7 a 10 días.
Es esta una etapa crítica para el paciente, debido al alto índice de mortalidad.
Una vez superada comienza la etapa de convalescencia.

Diagnóstico Radiológico

El examen radiográfico de tórax revela en forma temprana infiltrados bilaterales simétricos intersticiales que pueden mostrar patrones de líquido intraalveolar.
Estas imágenes son compatibles con las observadas en las enfermedades que se acompañan de distress respiratorio del adulto.
Radiografía de tórax de un paciente en el momento de su ingreso al hospital (panel A) y durante el período de incremento de distress respiratorio dos días mas tarde (panel B). Se puede ver infiltrado intersticial difuso y peribronquial simétrico que se desarrolló en ese lapso.



Exámenes complementarios de Laboratorio

En el Hemograma se observa: leucocitosis con desviación a la izquierda, neutrofilia con formas inmaduras circulantes (metamielocitos), linfocitos atípicos en sangre periférica, hematocrito aumentado y plaquetopenia.

Parte del aumento del número de células encontrado se debe a hemoconcentración, debido a la pérdida de líquido extracelular (plasma) al espacio insterticial, fundamentalmente pulmonar.

Se debe poner especial atención a este hecho, ya que la principal medida para mejorar esto es la reposición de líquidos, que en este caso aumenta el edema intersticial y alveolar en el SPH o del espacio retroperitoneal en el FHSR, agravando el estado del paciente.

También pueden encontrarse aumentos de la dehidrogenasa láctica, transaminasas glutámico pirúvica y oxalacética, e hipoproteinemia.

Diagnóstico microbiológico (Diagnóstico Etiológico)

Los primeros diagnósticos de SPH utilizaban hantavirus adaptados a cultivo, de las especies SEO, PUU, PH, and HTN como antígenos para la detección de anticuerpos contra Hantavirus FC. Estos antígenos heterólogos si bien fueron útiles, se mostraban subóptimos para la detección de anticuerpos contra dicha especie.

La utilización de RT-PCR se mostró sensible para la detección de FC RNA tanto de autopsisa como de células mononucleares de sangre periférica de pacientes vivos.

Además, los antígenos virales podían detectarse en secciones de tejido por inmunotinciones, usando anticuerpos monoclonales contra PUU.

Para desarrollar un diagnóstico rápido con capacidad para detectar anticuerpos anti FC se desarrollaron antígenos recombinantes utilizando la proteína N y la glicoproteína G1.

Mientras la detección de la proteína N se muestra inespecífica, ya que existen reacciones cruzadas entre numerosas especies, la proteina G1 es específica, manteniendose conservada en cada especie.

Se cuenta con dos técnicas indirectas para el diagnóstico rápido de hantavirus tanto en humanos como en ratones:
Un ELISA y un Western Blot que utilizan únicamente la proteína N, y un Western Blot que utiliza ambas proteínas, N y G1.

La investigación serológica inicial para la detección de anticuerpos anti Hantavirus comienza con un ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) con método de microcaptura en sandwich (ver capítulo de métodos diagnósticos).
Como antígeno blanco se utiliza proteína N recombinante para la detección de inmunoglobulinas de tipo IgG.

El estudio confirmatorio se realiza en formato de tiras de Western blot.

Se cuenta con dos estudios de Western Blot constituidos por antígenos diferentes.

Uno de ellos contiene cinco antígenos recombinantes: proteínas N y G1 de virus SN, proteína N de virus Seoul y péptidos sintéticos de las proteínas G1 y N de virus SN.

Los anticuerpos reactivos contra esos antígenos son detectados con una antigamaglobulina humana, preparada contra un conjugado de las cadenas pesada y liviana de las Ig. Este estudio es capaz de detectar IgM, pero fundamentalmente detecta IgG.

Un segundo Western Blot utiliza anti-IgG y anti-IgM (tambien diseñados contra conjugados), pero en estudios separados lo que permite diferenciar una inmunoglobulina de la otra. Se realiza con un panel de proteínas N completas purificadas, producidas en E.coli utilizando como vector un fago denominado T7.

Las proteínas utilizadas como antígenos derivan de Hantavirus tipo SN, BAY, Rio Mamoré, Muleshoe, Puumala y Seoul. Dado que se utiliza únicamente proteína N el resultado debe ser interpretado por intensidad de banda.


Estudio de Western blot para la detección de anticuerpos de tipo IgG en muestras de sangre de pacientes y roedores.
Se utilizó una dilución 1:500 de suero frente a un Western Blot que contenía cantidades equimolares de proteína N recombinante de los siguientes Hantavirus: 1) Bayou; 2) Muleshoe; 3) Puumala; 4) Rio Mamoré; 5) Seoul; y 6) Sin Nombre.
El resultado de estos sueros fue verificado posteriormente, mediante la realización de RT-PCR y análisis de secuencia: (A) paciente x, positivo para Bayou virus; (B) Suero de Oryzomys palustris positivo para Bayou virus- (C) Suero positivo de ratón para el virus Sin Nombre; (D), Control negativo.
Los anticuerpos unidos a los antígenos en fase sólida fueron detectados mediante fosfatasa alcalina conjugada a anti IgG humana en el paciente A y con anti -Peromyscus leucopus IgG en los casos B a D. La flecha indica la migración del antígeno viral completo T7N, ~55kDa.



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